产品货号：
WH0038
中文名称：
质粒小量提取试剂盒(1～5mL)
英文名称：
Mini Plasmid Kit(1-5mL)
产品规格：
50次|200次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒采用先进的硅胶膜吸附技术，操作简单、快速。菌体经碱裂解法处理后通过离心吸附柱，专一性结合DNA，洗去杂质，高效快速提取多至30μg的质粒DNA。本试剂盒采用独特的缓冲液配方，最大限度去除蛋白杂质及其它有机化合物，每次可处理1～5mL菌液。得到的DNA比传统试剂盒纯度更高，可直接用于酶切、转化、测序及PCR等分子生物学实验。
产品特点：
质粒得率：
试剂盒组成：
保存条件：
室温（15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2～8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
低拷贝或大质粒（>10kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
补充说明：
本试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取，同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌有一层较厚的细胞壁，会严重阻碍细菌细胞的裂解，因此必须在裂解细胞前破除，其破除方法如下：
收集适量的菌体，加入250μL溶液P1或TE，充分悬浮菌体，加入溶菌酶使其终浓度为10～20mg/ml，37℃处理30min左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌株和具体实验条件进行调整。
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产品特点：
- 快速：步骤少，操作简单，节省时间。
- 高效：可提取菌体85%以上质粒DNA。
质粒得率：
| 质粒类型 | 处理量 | 得率 | 质粒 |
| 高拷贝质粒 | 1～5mL | 6～30μg | pTZ,pUC,pBS,pTG-T |
| 低拷贝质粒 | 1～5mL | 3～12μg | pBR322,pACYC及其衍生载体 pSC101及其衍生载体， SuperCos,pWE15 |
试剂盒组成：
| 组分 | 50T | 200T |
| 平衡液BL | 30mL | 120mL |
| 溶液P1 | 15mL | 60mL |
| 溶液P2 | 15mL | 60mL |
| 溶液P3 | 20mL | 80mL |
| 去蛋白液PD | 30mL | 120mL |
| 漂洗液PW | 15mL | 50mL |
| 洗脱缓冲液EB | 15mL | 30mL |
| RNase A（10mg/ml) | 150μL | 600μL |
| 吸附柱CP3 | 50个 | 200个 |
| 收集管（2mL) | 50个 | 200个 |
保存条件：
室温（15～25℃)干燥条件下，可保存12个月，更长时间的保存可置于2～8℃。2～8℃保存条件下，若溶液产生沉淀，使用前应将试剂盒内的溶液在室温放置一段时间，必要时可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀。第一次使用前将RNase A加入溶液P1中，混匀后置于2～8℃保存，可稳定保存12个月以上。单独包装的RNase A在室温可稳定保存12个月以上。
注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项)
- 溶液P1在使用前先加入RNase A（将试剂盒中提供的RNase A全部加入），混匀，置于2～8℃保存。
- 使用前请先检查平衡液BL、溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
- 注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
- 所有离心步骤均为使用常规台式离心机室温下进行离心，速度为12000rpm（~13400×g)。
- 提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。
- 实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。
- 用平衡液BL处理过的柱子最好当天使用，放置时间过长会影响效果。
- 去蛋白液PD可以有效去除残留的蛋白污染，当宿主菌为endA+（TG1、BL21、HB101、ET12567、JM系列）等核酸酶含量较高的菌株时，强烈推荐使用去蛋白液PD。
使用方法：
使用前请先在漂洗液PW中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶上的标签。
- 柱平衡步骤：向吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中）加入500μL的平衡液BL，12000rpm（~13400×g)离心1min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）
- 取1～5mL过夜培养的菌液，加入离心管中，使用常规台式离心机，12000rpm（~13400×g)离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。
- 向留有菌体沉淀的离心管中加入250μL溶液P1（请先检查是否已加入RNase A），使用移液器或涡旋振荡器彻底悬浮细菌沉淀。
注意：如果有未彻底混匀的菌块，会影响裂解，导致提取量和纯度偏低。 - 向离心管中加入250μL溶液P2，温和地上下翻转6～8次使菌体充分裂解。
注意：温和地混合，不要剧烈震荡，以免打断基因组DNA，造成提取的质粒中混有基因组DNA片断。此时菌液应变得清亮粘稠，所用时间不应超过5min，以免质粒受到破坏。如果未变得清亮，可能由于菌体过多，裂解不彻底，应减少菌体量。 - 向离心管中加入350μL溶液P3，立即温和地上下翻转6～8次，充分混匀，此时将出现白色絮状沉淀。12000rpm （~13400×g)离心10min。
注意：P3加入后应立即混合，避免产生局部沉淀。如果上清中还有微小白色沉淀，可再次离心后取上清。 - 将上一步收集的上清液用移液器转移到吸附柱CP3中（吸附柱放入收集管中），注意尽量不要吸出沉淀。12000rpm （~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
- 可选步骤：向吸附柱CP3中加入500μL去蛋白液PD，12000rpm （~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3重新放回收集管中。
如果宿主菌是end A+宿主菌（TG1，BL21，HB101，JM系列，ET12567等），这些宿主菌含有大量的核酸酶，易降解质粒DNA，推荐采用此步。如果宿主菌是endA宿主菌（DH5α，TOP10等），这步可省略。 - 向吸附柱CP3中加入600μL漂洗液PW（请先检查是否已加入无水乙醇），12000rpm（~13400×g)离心30～60sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱CP3放入收集管中。
- 重复操作步骤8。
- 将吸附柱CP3放入收集管中,12000rpm （~13400×g)离心2min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。
注意：漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应（酶切、PCR等）实验。为确保下游实验不受残留乙醇的影响，建议将吸附柱CP3开盖，置于室温放置数分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。 - 将吸附柱CP3置于一个干净的离心管中，向吸附膜的中间部位滴加50～100μL洗脱缓冲液EB，室温放置2min，12000rpm （~13400×g)离心2min将质粒溶液收集到离心管中。
注意：洗脱缓冲液体积不应少于50μL，体积过小影响回收效率。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O做洗脱液，并保证其pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。且DNA产物应保存在-20℃，以防DNA降解。为了增加质粒的回收率，可将得到的溶液重新加入吸附柱中，室温放置2min，12000rpm（~13400×g)离心2min，将质粒溶液收集到离心管中。
低拷贝或大质粒（>10kb）提取：
如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5～10mL过夜培养物，同时按照比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液EB应在65～70℃水浴预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。
补充说明：
本试剂盒既适用于革兰氏阴性菌中质粒的提取，同时也可从革兰氏阳性菌中提取质粒。由于革兰氏阳性菌有一层较厚的细胞壁，会严重阻碍细菌细胞的裂解，因此必须在裂解细胞前破除，其破除方法如下：
收集适量的菌体，加入250μL溶液P1或TE，充分悬浮菌体，加入溶菌酶使其终浓度为10～20mg/ml，37℃处理30min左右。加入溶菌酶的浓度和处理的时间可根据不同的菌株和具体实验条件进行调整。
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